RIP实验qPCR结果分析,审稿人要我提交PCR原始数据

RIP实验qPCR结果分析,审稿人要我提交PCR原始数据

∪▂∪ 那么，我们如何从实验设计到结果分析呢？ 实验设计：种植2个小细胞培养皿（3.5cm），其中一皿加药物，另一皿加对照。 经过一段时间的处理后，收集细胞提取RNA，然后进行反转录，然后对RIP后的RNA产物进行测序分析，从全基因组中寻找目标蛋白的RNA结合位点，并通过高效测序获得。 高通量数据结果。 1.1.RIP免疫沉淀实验流程主要有两种不同的RIP实验

RIP实验qPCR结果分析

RIP实验步骤：1.裂解样品1.细胞生长约90%覆盖率，计数细胞，收集约1×10^7个细胞；2.1000×g，4℃离心5分钟，弃上清；3.用1×预冷的PBS洗涤两次，弃上清；4.用等体积的1×PLB裂解RIP结果进行PCR分析实时qPCR是在PCR扩增过程中通过荧光信号实时检测PCR的进展情况。 由于在PCR扩增指数期间，模板的Ct值与模板的初始拷贝数之间存在线性关系，因此它成为一个常数

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如果得到的结果与1偏差较大，则表明存在计算误差或实验误差较大。 在前面的示例中，在每个时间点采集并分析了三个单独的RNA样本。 因此，每个样品均通过Bio127：ReferenceChIP的算法单独处理。 输入稀释因子=（保存的输入染色质分数）-1（-1幂）（注：

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RIP结果分析1RIP结果分析2七、RIP实验的应用1.探索核RNA-蛋白质相互作用、细胞质RNA-蛋白质相互作用以及疾病模型的调控机制。 ①核RNA-蛋白质相互作用②胞质RNA-蛋白质相互作用2.探索EMI1、RIP实验操作应注意样品内源或操作环境中RNA酶的影响2.RIP实验抗体应至少优于IP等级4.RIP技术结果分析案例展示——以电泳结果为例，根据RIP-QPCR计算

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RIPtechnology(RNABindingProteinImmunoprecipitationAssay,RNAbindingproteinimmunoprecipitation)mainlyusesantibodiesagainstthetargetproteintoprecipitatethecorrespondingRNA-proteincomplex,andafterseparationandpurification,theRIPtestresultofthecomplexisgenerallytheproductTheQ-PCRresultdataorhigh-throughputsequencingdata,asshowninthefigureisanexampleoftheQ-PCRresultoftheRIPproduct. RIP产物的qPCR检测结果表明，EZH2蛋白可以与图中所示的几种RNA结合并相互作用。 目录浏览1.基因表达调控