RIP 实验流程,Rip实验

RIP 实验流程,Rip实验

RIP技术实验流程RNA免疫沉淀RIP实验流程分离的RNA可以通过多种分子方法进行分析，包括终点RT-PCR和定量RT-PCR（如果RBP的结合靶标已知），微阵列1.实验流程图2.RIP实验流程（1）.获得细胞裂解液A.单层细胞或贴壁细胞的处理1.W用冷PBS将培养皿中的细胞灰化两次。加入冷PBS后，用细胞刮刀向下刮细胞，收集到

文中利用cyclinA等蛋白的抗体进行RIP，然后用PCR检测circ-Foxo3，其他结果显示在柱状图中：2.实验过程本文采用模式生物果蝇的S2细胞作为研究对象。 1.将上一步的EP管放在磁力架上，除去上清液，并向每个管中添加900µlRIPI免疫沉淀缓冲液。 2.快速解冻第一步制备的细胞液，12000rpm、4℃离心10分钟。 取100µl上清液并添加到上一步中

＞▂＜ 1.RIP技术的实验步骤●细胞提取：从细胞中提取总蛋白，包括RNA结合蛋白●免疫共沉淀：将提取的细胞蛋白与特异性抗体结合形成免疫复合物●沉淀：使用蛋白A/G等具有亲和力的材料如磁珠将不含RIP。实验步骤：1.裂解样品1.细胞生长约90%覆盖率，细胞计数，收集约1×10^7个细胞；2.1000×g，4°离心5分钟 可弃去上清；3.用1×预冷的PBS洗涤两次，弃去上清；4.用等体积的1×PLB

(1)每组RIP样品制备20μLProteinA/Gbeads，加入0.5mL聚合酶解缓冲液，颠倒混匀，磁力架上吸去上清，重复洗涤1次。 2)加入20μL聚合酶解缓冲液恢复初始体积。 五、技术流程文库构建流程RIP实验步骤1.获取细胞裂解液，用冷PBS洗涤培养皿中的细胞，加入冷PBS两次，用细胞刮刀刮去细胞，收集至附管中，1500rpm、4℃5min离心，弃上清，收集